توضیحات
بوئن
محلول بوئن ترکیبی از اسید استیک 5%، فرمالدئید 9% و اسید پیکریک 1.5% در محلول آبی است. محلول بوئن با مخلوط کردن محلول اشباع اسید پیکریک در اتانول 95 درصد (80 میلی لیتر) با فرمالین ( فرمالدئید 37-40 درصد) (15 میلی لیتر) و اسید استیک گلاسیال (5 میلی لیتر) تهیه می شود.
محلول بوئن از چهار جزء تشکیل شده است:
اسید پیکریک (25 گرم در لیتر): اسید پیکریک یک اسید قوی است که به حفظ ساختار سلولی کمک می کند.
اسید استیک (10 گرم در لیتر): اسید استیک به حفظ رنگ طبیعی بافت کمک میکند.
فرمالدهید (40 میلی لیتر در لیتر): فرمالدهید یک عامل ضد عفونی کننده است که از رشد باکتری ها و قارچ ها جلوگیری می کند.
آب مقطر (تا 1 لیتر): آب مقطر برای رقیق کردن اجزای دیگر محلول استفاده می شود.
محلول بوئن برای فیکس کردن طیف گسترده ای از نمونه های بافتی از جمله بافت های نرم، بافت های سخت، بافت های سرطانی و بافت های آلوده استفاده می شود. این محلول به ویژه برای فیکس کردن بافت های نرم که به راحتی فاسد می شوند، مانند پوست، مخاط و بافت های عصبی، مناسب است.
محلول بوئن به مدت 24 تا 72 ساعت برای فیکس کردن نمونه ها استفاده می شود. سپس نمونه ها برای برش و رنگ آمیزی آماده می شوند.
محلول بوئن یک محلول فیکس کننده موثر است که به حفظ ساختار و رنگ طبیعی بافت ها کمک می کند. این محلول برای طیف گسترده ای از نمونه های بافتی مناسب است و به ویژه برای فیکس کردن بافت های نرم که به راحتی فاسد می شوند، مناسب است.
کاربرد محلول بوئن
محلول بوئن یک محلول فیکس کننده مؤثر است که به حفظ ساختار و رنگ طبیعی بافت ها کمک می کند. محلول بوئن برای طیف گسترده ای از نمونه های بافتی مناسب است. برای فیکس کردن بافت های نرم که به راحتی فاسد می شوند و هنگامی که ساختارهای نرم و ظریف بافت باید حفظ شوند، تثبیتکننده بسیار خوبی است.
باتوجه به نگرانی از اینکه فیکساتورهای رایج، مانند فرمالین، ممکن است ساختار بافت های بیضه را مخدوش کنند، محلول Bouin به طور سنتی فیکساتور توصیه شده برای نمونه های بیوپسی بیضه بوده است.
محلول بوئن با بافتی که متعاقباً رنگ آمیزی تری کروم می شود، نتایج بسیار خوبی می دهد؛ لذا به عنوان ثابتکننده و خشک کننده برای بافت هایی که با روش های تری کروم رنگ آمیزی شدهاند عمل می کند. برخی از نمونه هایی که استفاده از محلول بوئن به عنوان فیکساتور برای آنها توصیه شده است عبارتاند از:
پوست
مخاط و بافت های عصبی
بیوپسی بیضه
بیوپسی پروستات
بیوپسی کلیه ها
بافت های سخت
بافت های سرطانی
بافت های آلوده
بیوپسی های دستگاه گوارش
جنین حیوانات
بافت غدد درون ریز
لخته های مغز استخوان
بیوپسی غدد لنفاوی
محدودیت استفاده بوئن
محلول بوئن گلیکوژن را به خوبی حفظ میکند، اما معمولاً گلبول های قرمز را لیز (تخریب) میکند؛ لذا از محلول بوئن نباید برای حفظ گلبول های قرمز خون یا بافت ها برای بررسی میکروسکوپ الکترونی استفاده شود. محلول بوئن مایکروویو شده نباید دوباره استفاده شود. پس از مصرف محلول را دور بریزید. محلول بوئن به دلیل داشتن ماهیت اسیدی، رسوبات کوچک کلسیم و رسوبات آهن را به آرامی از بین میبرد.
مزایا محلول بوئن
تثبیت در محلول بوئن منجر به رنگ آمیزی شدید H&E می شود و به همین دلیل توسط برخی از پاتولوژیست ها ترجیح داده می شود.
در فیکساسیون بوئن، گره ها سفید باقی می مانند و چربی زرد رنگ می شود و در نتیجه می تواند یافتن غدد لنفاوی کوچک را تسهیل کند.
سیال بوئن به سرعت نفوذ می کند، به طور یکنواخت تثبیت می کند، لکه های هسته ای واضح ایجاد می کند و ساختارها را با ویژگی های نرم و ظریف حفظ می کند.
از تثبیت طولانی مدت با محلول بوئن می توان برای کلسیم زدایی بافت استفاده کرد.
زمانی که لازم است گلیکوژن و سایر کربوهیدرات ها در بافت حفظ شوند، استفاده از محلول بوئن مفید است.
محلول بوئن یک تثبیت کننده مرکب است. هر بخش از ترکیب دارای ویژگی خاصی است: اسید استیک باعث تورم می شود که با کوچک شدن ناشی از اسید پیکریک معکوس می شود. اثر تثبیت کننده ملایم اسید پیکریک، اثر سفت شدن فرمالین را کاهش میدهد. اسید پیکریک بافت را به رنگ زرد روشن در میآورد.
روش تثبیت
پس از برداشتن، نمونه را مستقیماً در محلول بوئن قرار دهید
نمونههای بافت را تا زمان آمادهشدن برای پردازش یا حداکثر 72 ساعت در مایع بوئن نگه دارید.
بافت ثابت شده با محلول بوئن را به مدت 1 ساعت قبل از پردازش، به طور کامل در اتیل الکل 70٪ بشویید.
در مرحله تثبیت با فرمالین 10% ، بافر فسفات را روی پردازشگر بافت قرار دهید.
مقدار اسید پیکریک اضافی باید قبل از رنگ آمیزی با اتانول 70% از بافت ها شسته شود. رنگ دانه زرد پیکریک اسید معمولاً در فرایند پارافینیزاسیون از بخش های بافتی حذف می شود. بلوک های بافت و برش های بافت ممکن است اسید پیکریک اضافی را حفظ کنند. در صورت نیاز، روش های اضافی برای حذف اسید پیکریک عبارتاند از:
برش های بافت پارافینه شده را در آب جاری یا در اتیل الکل 70 درصد بشویید تا رنگ دانه زرد پاک شود.
برش های بافت پارافین شده را در اتیل الکل 70 درصد اشباع شده با کربنات لیتیوم بشویید تا رنگدانه زرد حذف شود.
کاربردهای پس از تثبیت محلول بوئن شامل استفاده به عنوان ماده خشککننده برای تشدید واکنش های رنگی در روش های رنگ آمیزی تری کروم است.
توصیههای تثبیت
لخته مغز استخوان/بیوپسی: حداقل 4 ساعت تا 24 ساعت.
غدد لنفاوی: تا 24 ساعت. گره های کوچک (5 میلی متر یا کمتر) باید نصف شوند. گره های بزرگ تر را جدا کنید تا هیچ قطعه ای ضخیم تر از 2-3 میلی متر نباشد.
بیوپسی های کوچک: حداقل 4 ساعت.
توصیه ها
اگر نمونه در ابتدا در فرمالین 10% بافر فسفات دریافت شد، نمونه را قبل از قرار دادن در محلول بوئن به طور کامل در آب لوله کشی بشویید.
نگهداری طولانی بافت در محلول بوئن توصیه نمی شود
پس از حداکثر زمان تثبیت 72 ساعت، بافت مرطوب تثبیت شده در بوئن را به اتیل الکل 70 درصد یا فرمالین 10 درصد بافر فسفات برای اهداف نگهداری طولانی مدت منتقل کنید.
محلول بوئن به مدت 24 تا 72 ساعت برای فیکس کردن نمونهها استفاده می شود. سپس نمونهها برای برش و رنگ آمیزی آماده می شوند. بافت را به دلیل اسید پیکریک زرد روشن می کند.
توصیه های ایمنی هنگام کار با محلول بوئن
محلول بوئن به دلیل وجود فرمالدئید در دسته سرطان زاهای دسته 1A طبقه بندی می شود. در استانداردهای معتبر، عوارض زیر برای محلول بوئن ثبت شده است:
H314 باعث سوختگی شدید پوست و آسیب چشم می شود.
H317 ممکن است باعث واکنش پوستی آلرژیک شود.
H341 مشکوک به ایجاد نقص ژنتیکی.
H350 ممکن است باعث سرطان شود.
Bio Optica Bouin Solution
Application:
Bouin is histological and cytological fixative. It gives brilliant staining with cytoplasmic stains (recommended for trichrome staining). It leaves tissues soft and glycogen is well preserved. Not recommended for hemopoietic organs, hemorrhagic tissues and nervous system
Fixation technique:
1) Volume ratio specimen/ fixative 1:50
2) Specimen thickness 1 cm max
3) Fixation time at room temperature: for specimens up to 5 mm 5 hours, for greater thickness 1-3 days
Note: do not wash in water after fixation, but pass directly in alcohol for dehydration.
Components:
Picric acid
Acetic acid
Formaldehyide 30% w/v
Deionized water
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.