توضیحات
محلول رایت (محلول ائوزین، متیلن بلو)
محلول رایت یک محلول کلاسیک جهت رنگ آمیزی لام های خونی و نمونه های مغز استخوان و برش های بافت پارافینی می باشد. گلبول های قرمز رنگ صورتی، پلاکت رنگ صورتی کمرنگ، سیتوپلاسم لنفوسیت رنگ آبی آسمانی، سیتوپلاسم مونوسیت رنگ آبی کمرنگ و هسته لکوسیت رنگ ارغوانی به خود می گیرند. همچنین از محلول گیمسا برای رنگ آمیزی قارچ ها و باکتری کلامیدیا و همچنین رنگ آمیزی سلول های Mast و کروموزوم ها نیز استفاده می شود.
رنگ رایت به طور کلی در خون شناسی کاربرد دارد. همچنین به طور اختصاصی در خون شناسی، سیتولوژی و سیتوژنتیک مورد استفاده قرار می گیرد. استفاده از رنگ رایت باعث تمایز مورفولوژی هسته ای و سیتوپلاسماتیک می شود که در قسمت هایی مانند ترمومبوسیت ها، گلبول های قرمز و لمفوسیت ها که در قطره خون یا مغز استخوان موجود اند.
روش ساخت آن شامل حرارت دادن متیلن بلو با بی کربنات سدیم و به دنبال آن ترکیب مخلوط با ائوزین است. به دلیل فعالیت اکسید کننده تدریجی قلیایی برای حفظ خواص آزروفیل رنگ های پلی کروم اضافه می شود. این رنگ در سیتوژنتیک برای تشخیص جهش های کروموزومی استفاده می شود. همچنین در تشخیص سندرم های ژنتیکی نیز کاربرد دارد.
نکاتی در مورد رنگ رایت
رنگ رایت دارای دو رنگدانه است.
رنگینه اسیدی مثل الوزین
رنگینه بازی با قلیائی مثل متیلن بلو آبی متیلن )
اجزای اسیدی سلول ها رنگ های قلیائی را جذب می کند بنابراین این ساختارها را قلیا دوست می گویند، مثل هسته سلول که در این رنگ آمیزی آبی رنگ می شود. ساختارهایی که رنگینه های اسیدی را جذب می کند. اسید دوست هستند. این اجرای موجود در سیتوپلاسم با این رنگ آمیزی قرمز می شوند. همچنین قسمت هایی که هر دو رنگینه اسیدی و بازی را به خود جذب می کند، خنثی دوست اند.
رنگ آمیزی رایت نوعی رنگ آمیزی رومانوفسکی است که به طور معمول در آزمایشگاه های هماتولوژی برای رنگ آمیزی معمول اسمیر خون محیطی استفاده می شود. همچنین برای رنگ آمیزی آسپیراسیون مغز استخوان، نمونه های ادرار و مشاهده انگل های مالاریا در اسمیر خون به کار می رود.
رنگ آمیزی رایت به نام جیمز هومر رایت نامگذاری شده است که در سال 1902 میلادی بر اساس اصلاحی بر رنگ آمیزی رومانوفسکی آن را ابداع کرد. این رنگ آمیزی به راحتی بین سلول های خونی تمایز قائل می شود و از این رو برای انجام شمارش افتراقی گلبول های سفید خون (WBC) و ارزیابی مورفولوژی سلول های خونی به طور گسترده مورد استفاده قرار می گیرد.
رنگ آمیزی رایت یک رنگ آمیزی چند رنگ است که از مخلوطی از ائوزین و متیلن آبی تشکیل شده است. از آنجایی که رنگ آمیزی رایت بر پایه متانول است، نیازی به مرحله تثبیت قبل از رنگ آمیزی ندارد. با این حال، تثبیت به کاهش اثرات ناشی از رطوبت که ممکن است در روزهای مرطوب یا با رنگ آمیزی قدیمی رخ دهد، کمک می کند.
متانول سلول ها را به لام فیکس می کند. ائوزین Y یک رنگ اسیدی آنیونی و متیلن آبی یک رنگ بازی کاتیونی است. هنگام رقیق شدن در آب بافر، یونیزاسیون رخ می دهد. ائوزین اجزای بازی مانند هموگلوبین و گرانول های ائوزینوفیلی را به رنگ نارنجی تا صورتی رنگ می کند. متیلن آبی اجزای سلولی اسیدی مانند اسید نوکلئیک و گرانول های بازوفیلی را در شدت های مختلف آبی رنگ می کند. اجزای خنثی سلول ها توسط هر دو جزء رنگ آمیزی می شوند و رنگ های متغیری ایجاد می کنند.
معرف ها
رنگ ممکن است به صورت پودری خریداری شود و سپس با متانول مخلوط شده و یا اینکه از ابتدا به شکل یک محلول آماده خریداری شود.
** محلول رنگآمیزی **
- پودر رنگ آمیزی رایت = 1 گرم
- متانول بدون آب = 400 میلیلیتر
- بافر فسفات (0.15 مولار، ph 6.5/6.8)
- پتاسیم دی هیدروژن فسفات، بدون آب = 0.663 گرم
- د یسدیم هیدروژن فسفات، بدون آب = 0.256 گرم
- آب مقطر = 100 میلی لیتر
روند اجرا
- یک لایه نازک از خون یا مغز استخوان روی لام میکروسکوپی تهیه کنید و بگذارید در هوا خشک شود.
- گستره (اسمیر) خشک شده در هوا را روی رک رنگ آمیزی لام قرار دهید، به گونه ای که سمت اسمیر به سمت بالا باشد.
- فیلم خون را با محلول رنگ آمیزی رقیق نشده بپوشانید. رنگ رقیق نشده، گستره را تثبیت می کند و تا حدی رنگ می کند.
- به مدت 2 الی 3 دقیقه بگذارید بماند.
- تقریباً مقدار مساوی آب بافر شده (pH 6.5) اضافه کنید (به آرامی مخلوط کنید تا درخشش فلزی ایجاد شود). رنگ رقیق شده نباید سرریز کند.
- به مدت ۵ دقیقه بگذارید بماند.
- بدون اینکه لام را تکان دهید، آن را با آب مقطر بشویید تا قسمت های نازک تر گستره به رنگ صورتی مایل به قرمز درآیند.
- اجازه دهید لام در دمای اتاق خشک شود و زیر میکروسکوپ بررسی کنید.
Wright’s Solution
Wright’s stain is a histologic stain that facilitates the differentiation of blood cell types. It is used primarily to stain peripheral blood smears and bone marrow aspirates which are examined under a light microscope. In cytogenetics it is used to stain chromosomes to facilitate diagnosis of syndromes and diseases.
Wright’s stain is classically a mixture of eosin (red) and methylene blue dyes.
It is named for James Homer Wright, who devised the stain, a modification of the Romanowsky stain, in 1902. Because it distinguishes easily between blood cells, it became widely used for performing differential white blood cell counts, which are routinely ordered when conditions such as infection or leukemia are suspected.
The related stains are known as the buffered Wright stain, the Wright-Giemsa stain (a combination of Wright and Giemsa stains), and the buffered Wright-Giemsa stain, and specific instructions depend on the solutions being used, which may include eosin Y, azure B, and methylene blue (some commercial preparations combine solutions to simplify staining). The May–Grünwald stain, which produces a more intense coloration, also takes a longer time to perform.
Urine samples stained with Wright’s stain will identify eosinophils, which can indicate interstitial nephritis or urinary tract infection.
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.