توضیحات
رنگ آمیزی تری کروم ماسون
اغلب تکنیک های رنگ آمیزی افتراقی که برای بافت های پیوندی به کار برده می شود، در دسته رنگ آمیزی به روش تری کروم قرار می گیرند.
رنگ آمیزی به روش تری کروم، یک تکنیک رنگ آمیزی در آزمایشگاه است که در آن از دو یا چند رنگ اسیدی به همراه پلی اسید استفاده می شود تا دو ماده به روش افتراقی و در دو رنگ متضاد رنگ آمیزی شوند. رایج ترین کاربرد این روش، رنگ آمیزی فیبر عضلات به رنگ قرمز و رشته کلاژن به رنگ سبز یا آبی است. از آنجایی که ممکن است افتراق فیبرهای عضلات صاف از رشته کلاژن دشوار باشد، رنگ آمیزی تری کروم اهمیت زیادی دارد. رنگ آمیزی تری کروم به شناسایی افزایش بافت کلاژن (به عنوان مثال تغییرات فیبروتیک مانند سیروز کبدی) و همچنین تشخیص تومورهای ناشی از سلول های عضلانی و فیبروبلاست کمک می کند.
تری کروم ماسون و تری کروم گوموری دو مورد از تکنیک های رایج رنگ آمیزی های تری کروم در آزمایشگاه هستند.
۲. رنگ آمیزی تری کروم گوموری
رنگ آمیزی به روش تری کروم ماسون عمدتاً برای رنگ آمیزی نمونه ی برداشته شده از کلیه صورت می گیرد و برای رنگ آمیزی سایر بافت ها معمولاٌ از روش تری کروم گوموری استفاده می شود. انجام این روش آسان تر است و رنگ آمیزی کلاژن و عضله با آن به خوبی روش تری کروم ماسون است. در ادامه ابتدا به بررسی مواد و محلول های مورد استفاده در تکنیک رنگ آمیزی تری کروم گوموری خواهیم پرداخت و سپس روش انجام رنگ آمیزی و نتایج حاصل از آن را بررسی خواهیم کرد. توصیه می شود بافت در بافر فرمالین خنثی ۱۰% فیکس شود و برش 5 میکرومتری از بافت پارافین گیری شده را روی لام رنگ آمیزی کنید.
۱-۲. آماده سازی محلول ها
۱-۱-۲. محلول بوئن:
اسید پیکریک (اشباع شده) ——————- ۷۵ میلی لیتر
فرمالین غلیظ ۴۰%-۳۷% ——————- ۲۵ میلی لیتر
استیک اسید گلاسیال ——————- ۵ میلی لیتر
۲-۱-۲. محلول هماتوکسیلین آهن Weigert اصلاح شده
آماده سازی استوک محلول A:
هماتوکسیلین کریستال C.I. 75290 ——-ء ۲ گرم
اتیل الکل ۹۰٪ ———————— ۱۰۰ میلی لیتر
آماده سازی استوک محلول B:
فریک کلرید محلول در آب ۶۲% ——————- ۴ میلی لیتر
آب مقطر ———————————— ۹۵ میلی لیتر
اسید هیدروکلریک غلیظ ———————— ۱ میلی لیتر
قسمت های مساوی محلول استوک A و B را مخلوط کنید.
۳-۱-۲. آماده سازی رنگ تری کروم
Chromotrope 2R, C.I. 16570 ——————-ء ۰/۶گرم
آنیلین بلو C.I. 42755ء ————————— ۰/۳ گرم
اسید استیک گلاسیال —————————- ۱ میلی لیتر
اسید فسفوتنگستیک —————————- ۰/۸ گرم
آب مقطر ————————————-۱۰۰ میلی لیتر
در صورتی که تمایل دارید کلاژن به رنگ سبز مشاهده شود، می توانید فست گرین اف.سی.اف یا سبز روشن SF جایگزین آنیلین بلو نمایید.
۴-۱-۲. اسید استیک ۰/۵ %
اسید استیک گلاسیال ———- ۰/۵ میلی لیتر
آب مقطر ——————– ۹۹/۵ میلی لیتر
۲-۲. مراحل رنگ آمیزی به روش تری کروم گوموری
۱. مراحل پارافین زدایی و هیدراسیون بافت را انجام دهید.
۲. محلول بوئن را در دمای ۵۸ درجه سانتیگراد گرم کنید. لام را به مدت ۱۰ دقیقه درون محلول بوئن گرم قرار دهید.
۳. لام را زیر آب بشویید تا زمانی که رنگ زرد از بین برود و سپس لام را با استفاده از آب مقطر آبکشی کنید.
۴. لام را به مدت ۵ دقیقه درون رنگ محلول هماتوکسیلین آهن Weigert اصلاح شده قرار دهید.
۵. لام را به مدت کوتاهی زیر آب شسته و دو مرتبه با آب مقطر آبکشی کنید.
۶. سپس لام را به مدت ۵ ثانیه در اسید کلریدریک ۰/۵ % که با الکل۷۰% مخلوط شده است قرار دهید.
۷. لام را به مدت ۳۰ ثانیه زیر آب شسته و دو مرتبه با آب مقطر آبکشی کنید.
۸. لام را به مدت ۱۵ دقیقه در رنگ تری کروم قرار دهید.
۹. سپس آن را به مدت ۱۰ ثانیه در اسید استیک ۰/۵ % محلول در آب قرار داده و سپس دو مرتبه با آب مقطر آبکشی کنید.
۱۰. به منظور دهیدراسیون، لام را به ترتیب در الکل با خلوص های مختلف قرار دهید.
۱۱. در انتها لام را به کمک زایلین شفاف (clear) نمایید.
۳-۲. نتایج
الیاف عضلانی ————————- قرمز
کلاژن ها —————————— آبی
هسته ها —————————- آبی متمایل به سیاه
گلبول های قرمز ——————— قرمز
نقد و بررسی‌ها
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.