توضیحات
رنگ آمیزی آلسین بلو (pH=2.5) با استفاده از مایکروویو
آلسین بلو (Alcian blue) یکی از روش های رنگ آمیزی بافت است. در آزمایشگاه های هیستولوژی برای نمایش دادن موسین های اسیدی از این روش رنگ آمیزی استفاده می کنند.
رنگ آمیزی آلسین بلو بیشتر برای تشخیص آسیب های پاتولوژیکی در نمونه های بافتی دستگاه گوارش (GI) استفاده می شود. مواد مخاطی اسیدی پس از رنگ آمیزی با آلسین بلو به رنگ آبی فیروزه‌ای مشاهده می شوند.
همچنین استفاده از محلول‌های آلسین بلو با pH های مختلف می تواند به تمایز میان انواع مخاط اسیدی کمک کند.
آلسین بلو بعد از ترکیب با رنگ های دیگر کارایی بیشتری خواهد داشت. به عنوان مثال در ترکیب با روش هایی مانند PAS و کریبرگ بهتر عمل می کند و گستره ی رنگ آمیزی آن بیشتر می شود.
آلسین بلو در صورت ترکیب با رنگ PAS می تواند هر دو موسین اسیدی و خنثی را در یک نمونه بافتی نشان دهد. آلسین بلو باعث آبی شدن موسین های اسیدی می شود و PAS موسین های خنثی را به رنگ قرمز در می آورد.
در ادامه به معرفی روش رنگ آمیزی آلسین بلو (pH=2.5) با استفاده از مایکروویو می پردازیم.
مواد مورد نیاز:
فیکساتیو: بافر فرمالین %10
نمونه: برش های پارافینی 5 میکرومتری
محلول‌های مورد نیاز:
1- محلول استیک اسید %3
مواد مورد نیاز مقدار مورد نیاز
استیک اسید گلایسیال 3 میلی لیتر
آب مقطر 97 میلی لیتر
2- محلول آلسین بلو %1
مواد مورد نیاز مقدار مورد نیاز
رنگ آلسین بلو 8 میلی لیتر
استیک اسید %3 100 میلی لیتر
محلول به‌دست آمده را فیلتر کنید و چند کریستال تیمول به آن اضافه کنید.
3- محلول نوکلئار فست رد
مواد مورد نیاز مقدار مورد نیاز
نوکلئار فست رد 1 گرم
محلول آلومینیوم سولفات %5 100 میلی لیتر
نوکلئار فست رد را به کمک گرما در محلول آلومینیوم سولفات %5 حل کنید.
سپس محلول را خنک کرده و آن را فیلتر کنید تا صاف شود. در آخر چند دانه تیمول را به عنوان نگهدارنده به آن اضافه کنید.
مراحل رنگ آمیزی آلسین بلو (pH=2.5)
1) بافت را دپارافینه کنید سپس هیدراسیون با آب مقطر را انجام دهید.
2) لام را به مدت 3 دقیقه در استیک اسید %3 قرار دهید.
3) لام را در جار رنگ آمیزی که با 40 میلی‌لیتر محلول آلسین بلو %1 پر شده است قرار داده و آن را به مدت 3 دقیقه داخل مایکروویو سطح 1 (با قدرت W60) قرار دهید. بعد از گذشت این زمان جار را از مایکروویو بیرون بیاورید. سپس لام را چند مرتبه بالا و پایین کنید و اجازه دهید تا 5 دقیقه داخل محلول داغ (65 درجه سانتیگراد) باقی بماند.
* هنگام حرارت دادن محلول آلسین بلو به وسیله مایکروویو، قسمت بالای محلول 10 تا 15 درجه سانتیگراد گرم تر از قسمت پایینی آن است. بنابراین برای یکسان سازی دمای محلول، لام را در آن بالا و پایین می برند. این کار باعث می شود قسمت های مختلف بافت به طور یکنواخت رنگ آمیزی شوند.
4) در این مرحله لام را به مدت 1 دقیقه با آب شیر بشویید سپس آن را با آب مقطر آبکشی کنید.
5) لام را به مدت 3 دقیقه در محلول نوکلئار فست رد قرار دهید.
6) در مرحله بعد لام را سه مرتبه در آب مقطر بشویید.
7) حالا با کمک الکل هایی با درجه بندی های متفاوت، دهیدراسیون لام را انجام دهید.
8) لام را سه یا چهار مرتبه با زایلین تمیز کنید.
9) در مرحله آخر جهت از بین بردن حباب ها و بررسی راحت تر لام زیر میکروسکوپ آن را با رزین بپوشانید.
نتیجه رنگ آمیزی آلسین بلو
ترکیبات موکوسی (مخاطی) اسیدی سولفاته آبی
قارچ کریپتوکوکوس (Cryptococcus) آبی
هسته ها قرمز
توضیحات تکمیلی
هیچ محلول رنگ آمیزی آلسین بلویی به تنهایی نمی تواند همه ی پلی آنیون ها را رنگ آمیزی کند اما روش فوق که در pH=2.5 انجام شده است، همه ی پلی آنیون ها به جز موکو پلی ساکاریدهای سولفاته قوی را رنگ آمیزی می‌کند.
این روش برای نمایش دادن سلول های مخاطی موجود در دستگاه تنفس، روده کوچک و روده بزرگ و همچنین اجزای مختلف تشکیل دهنده پوست، دریچه های قلب، عروق بزرگ و غضروف ها بسیار مفید است.
ممکن است بتوانید رنگ آمیزی با محلول آلسین بلو را در دمای اتاق و بدون استفاده از مایکروویو و تجهیزات گرمایی دیگر انجام دهید اما احتمالا پروسه رنگ آمیزی در مدت زمان طولانی تری (حدود 30 دقیقه) انجام خواهد شد.
نقد و بررسی‌ها
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.