توضیحات
رنگ آمیزی اویل رد (روغن قرمز O) برای لیپیدها
تجمع چربی (لیپید) اضافی در بافت های محیطی را می توان یکی از علل بروز بسیاری از بیماری های متابولیک به شمار آورد. به همین دلیل، تکنیک های رنگ آمیزی برای بررسی لیپیدها در بافت های مختلف اهمیت بالایی دارد. تکنیک رنگ آمیزی اویل رد (روغن قرمز o یا oil red O) برای لیپیدها یکی از روش های کاربردی در آزمایشگاه های هیستوپاتولوژی است که به کمک آن می توان میزان لیپید و توزیع چربی در بافت ها را مورد ارزیابی قرار داد. به همین دلیل در این مطلب قصد داریم شما را با تکنیک رنگ آمیزی اویل رد (روغن قرمز O) برای لیپیدها و روش انجام آن آشنا کنیم.
مواد و محلول‌های مورد نیاز
برای آشنایی با تکنیک رنگ آمیزی اویل رد (روغن قرمز O) برای لیپیدها، لازم است ابتدا مروری بر مواد و محلول های مورد استفاده در این روش داشته باشیم. لام به ذکر است که در این مطلب، بافت های فیکس نشده ی کرایواستات (Unfixed cryostat sections) و یا بافت های فریز شده که در فرمالین تثبیت شده‌اند در ابعاد ۱۰ میکرومتر برش خورده و مورد استفاده قرار می گیرند.
۱. فیکساتیو: بافر فرمالین خنثی ۱۰%
۲. استوک اویل رد (روغن قرمز O)
اویل رد (روغن قرمز) – (C.I. 26125) ………………………۰/۵ گرم
ایزوپروپیل الکل ۹۹ %………………………………..۱۰۰/۰ میلی لیتر
۳. محلول کاربردی روغن قرمز O
استوک ایول رد (روغن قرمز او) …………………………………۶۰/۰ میلی لیتر
دکسترین محلول در آب ۱ % ………………………. ۴۰/۰ میلی لیتر
پیش از استفاده از محلول چند روز صبر کنید و حتما قبل از استفاده آن را از کاغذ فیلتر عبور دهید.
۴. محلول ایزوپروپیل الکل ۶۰٪
ایزوپروپیل الکل ۹۹%…………………………………..۶۰/۰ میلی لیتر
آب مقطر…………………………………………………۴۰/۰ میلی لیتر
۵. سدیم بورات ۰/۳ %
سدیم بورات (Na2 B4 O7 10H2O) ………………….. ۰/۳ گرم
آب مقطر……………………………………………. ۱۰۰/۰ میلی لیتر
روش رنگ آمیزی اویل رد
۱. بافت های کرایواستات را روی لام آزمایشگاهی قرار داده و ۱۵دقیقه درون بافر فرمالین خنثی ۱۰% قرار دهید تا فیکس شود. بافت های فریز شده که در فرمالین تثبیت شده‌اند را در آب قرار داده و سپس آن ها را روی لام آلبومینه قرار دهید. یک الی دو ساعت صبر کنید تا لام خشک شود.
توجه: برای ثابت نگه داشتن بافت روی لام حین رنگ آمیزی ممکن است از مواد مختلفی استفاده شود. آلبومین ماده‌ای است که چسبندگی نمونه را به لام شیشه ای حین رنگ آمیزی افزایش می دهد.
۲. لام‌ها را با آب مقطر آبکشی کنید.
۳. لام را چند مرتبه در ایزوپروپیل الکل ۶۰% فرو ببرید.
۴. لام را به مدت ۲۰ دقیقه درون محلول روغن قرمز O قرار دهید.
۵. لام را مجددا چند مرتبه در ایزوپروپیل الکل ۶۰% فرو ببرید.
۶. لام را ۴ مرتبه با آب مقطر آبکشی کنید.
۷. رنگ‌آمیزی متقابل (Counterstain) با رنگ هماتوکسیلین لیلی مایر اسیدی شده به مدت ۱ دقیقه انجام می‌شود.
۸. لام را سه مرتبه با آب مقطر آبکشی کنید.
۹. لام را به مدت ۱۵دقیقه درون سدیم بورات ۰/۳ قرار دهید.
۱۰. مجددا لام را ۴ مرتبه با آب مقطر آبکشی کنید.
۱۱. در نهایت روی لام گلیسیرین ریخته و آن‌را زیر میکروسکوپ بررسی کنید.
نتایج رنگ آمیزی به روش اویل رد (روغن قرمز O)
لیپیدها ……………………………………………………. قرمز
هسته ……………………………………………………… آبی
توضیحات
۱. بر اساس تجربیات، تکنیک رنگ آمیزی اویل رد (روغن قرمز O) با استفاده از ایزوپروپیل الکل نسبت به روش های انجام شده با پروپیلن گلیکول (propylene glycol)، الکل-استون (alcohol-acetone) یا تری اتیل فسفات (triethylphosphate) نتایج بهتری می دهد.
۲. اویل رد (روغن قرمز O) نسبت به سودان III و سودان IV برای رنگ آمیزی لیپیدها در مقاطع بافتی ارجحیت دارد.
۳. استفاده از محلول آبی دکسترین ۱٪ آبی به جای آب مقطر، در تهیه محلول روغن قرمز O باعث تثبیت و تشدید رنگ‌آمیزی می‌شود.
جمع بندی
همانطور که در قسمت مقدمه نیز گفته شد، تکنیک رنگ آمیزی اویل رد یا روغن قرمز O یک روش مهم آزمایشگاهی برای رنگ آمیزی بافت و بررسی چربی یا لیپید تجمع یافته در بافت است. در این مطلب سعی کردیم تا مروری بر این تکنیک رنگ‌آمیزی، مراحل انجام آن، مواد و محلول‌های مورد استفاده و نتایج حاصل از رنگ‌آمیزی روغن قرمز O را بررسی کنیم.
نقد و بررسی‌ها
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.